淡水养殖IOS
公司热线: 淡水养殖安卓
您现在的位置:淡水养殖 > 竹鼠养殖 > 正文
发布时间:2019-06-13 11:29
siRNA转染实验步骤 - 实验动物

siRNA转染实验步骤 - 实验动物

siRNA转染实验步骤 - 实验动物

下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下siRNA转染步骤(24孔板)1.提前1天细胞种植贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为。

悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。 如某细胞常规培养的细胞数是6105,那么就用2105的细胞进行转染。

2.转染过程⑴取(50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25l。

注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。 ⑵取1ul的Entranster-R4000,然后加入24ul无血清稀释液体,充分混匀,制成Entranster-R4000稀释液,终体积为25l。

室温静置5分钟。 ⑶将Entranster-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上)混合,室温静置15分钟。 转染复合物制备完成。

⑷将50l转染复合物滴加到有全培养基(可含10%血清和抗生素)的细胞上,前后移动培养皿,混合均匀。 注意:对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。

⑸转染后6小时观察细胞状态,如状态良好可不必更换培养基,继续培养24-96小时得到结果。

友情链接

网站首页 |公司介绍| 产品中心 | 空调通风| 公司资讯 |企业图集 |商盟认证 |联系我们

淡水养殖提供的文章均由网友转载于网络,若本站转载中的文章侵犯了您的权益,请与本站管理员联系.
Copyright (C) 2006-2019 www.449879.com淡水养殖 All Rights Reserved